Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

简要概述

        Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因的试剂盒，β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因。荧光素酶分析具有高灵敏度，大多数类型的细胞中没有荧光素酶活性，信号动态范围大，快速，低成本诸多优点。多功能常见报告基因是来自于北美的萤火虫Photinus pyralis的荧光素酶。此酶蛋白的活性不需要进行蛋白质翻译后修饰获得。它在活细胞中高浓度积累不会造成细胞毒性，可以在原核和真核细胞中使用。在ATP、镁离子和氧存在的条件下，萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化形成生物荧光。Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒利用与荧光强度相关的公式来定量检测活细胞和细胞抽提物中的荧光素酶。在荧光素酶的催化下，我们的试剂会产生具有强烈荧光的荧光产物。本试剂盒提供所有的必需组分，并且经过优化处理，我们还提供可以用于HTS（高通量筛选）实验方案。本试剂盒具有非常好的灵敏度，可以用于对灵敏度有要求的分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞（样品）（对于96孔板是100 µL /孔，对于384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监控560 nm处的发光强度

溶液制备 

1.工作溶液

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶子中，并充分混合以制成荧光素酶传感器的工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

1.运行荧光素酶测定：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在5％CO₂培养箱中于37°C孵育所需的时间，通常为4小时至过夜。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4在室温下孵育平板10-20分钟。 远离光线。

1.5用发光计监控发光强度。

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：

2.1通过包含不含萤光素酶的样品（作为对照）来测量背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中进行一系列萤光素酶稀释液。 注意：通常萤光素酶的浓度从1 pg / mL到1 ng / mL是合适的。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准发光计记录发光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。