生物制药残余DNA抽提试剂盒 (NaI法DNA提取试剂盒)简介
生物制药残留DNA提取试剂盒( Jinpan B48202 )
生物制药残留DNA提取试剂盒(NaI法)
残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的NaI法,适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。
残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 分钟。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。
生物制药残余DNA抽提试剂盒 (NaI法DNA提取试剂盒)
特点
● 遵照中国药典登载的NaI法*1
● 高回收率
● 单管操作(无需换管) ,耗时仅60-90 min
● 不需要Phenol和Chloroform等有机溶剂
● 兼容多种DNA
● 高回收率
● 单管操作(无需换管) ,耗时仅60-90 min
● 不需要Phenol和Chloroform等有机溶剂
● 兼容多种DNA
*1 为使DNA检测方法与标准保持同步,中国药典(The Chinese Pharmacopoeia)宣布建立残留细胞DNA检测国家标准。NaI法将作为残留DNA提取方法,被新增至2020版的中国药典中。
◆ 原理
1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于NaI;
2. Isoproanol与糖原选择性地共沉淀DNA。
2. Isoproanol与糖原选择性地共沉淀DNA。
◆ 使用方法
q 1、每个样品添加500uL或稀释至2 mL微离心管
q 2、加20uL洗涤剂组合液到每管,并轻轻的涡旋
q 3、选项:如果高浓度的蛋白质干扰DNA提取和DNA分析,每个样品中吸取添加20uL消化蛋白酶K(10mg/ml),在60°C, 20min,然后在95°C灭酶 5min
q 4、加500uL NaI溶液到每个微管中,并轻轻的涡旋
q 5、50°C孵育10分钟
q 6、加900uL异丙醇涡旋
q 7、室温孵化30min
8、离心机12000转15min
9、轻轻倒出或吸出上清液
q 10、添加1.8ml洗涤缓冲液(含酒精),涡旋
11、离心机12000转10min
q 12、轻轻倒出或吸出上清液
q 13、风干DNA
q 14、添加20-60uL水轻轻涡旋溶解DNA
q 15、纯化的DNA可进行PCR、实时定量PCR、酶切、DNA测序、荧光染色法
注意事项:
1) 用于稀释NaI溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2) 配制好的洗涤溶液(B)在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原 溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3) 在保存期间NaI溶液会结晶,加热溶液至50℃可帮助溶解。
4) 提取步骤应在DNA 变性之前,因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA 污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。
1) 用于稀释NaI溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2) 配制好的洗涤溶液(B)在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原 溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3) 在保存期间NaI溶液会结晶,加热溶液至50℃可帮助溶解。
4) 提取步骤应在DNA 变性之前,因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA 污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。
5) 请于各步骤使用搅拌器将溶液搅拌均匀。样品溶液里含有DNA酶时,进行步骤2之前请先进行步骤3。步骤4里样品溶解不*时,请把保温温度升至40-60℃帮助溶解。但是含有部分蛋白(γ-球蛋白)或高浓度蛋白的样品(>50mg/ml),加热可能会导致蛋白聚集,请注意。
◆ 应用案例
DNA spiking test(加标回收实验)
DNA Extractor Kit( Jinpan B48202 )可以高产量提取残留DNA,甚至少量残留DNA。
◆ 试剂盒构成
内容物
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内容量
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NaI法溶液
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25ml
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洗涤剂组合液
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1ml
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洗涤缓冲液(无酒精)
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30 mL
|
糖原溶液
|
100uL
|
备注:每种成分不单独出售
试剂盒不包含:
乙醇(洗涤缓冲液)
异丙醇(用于DNA沉淀)
2ml微复合管(离心或等效的)
微型离心机(离心或等效的)
◆ Jinpan B48202产品信息
产品编号
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产品名称
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储存
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包装
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B48202
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DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method)
残留DNA提取试剂盒(NaI法) |
2-10℃
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50 tests
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■ 保存
2 – 10℃,试剂盒的保存期为2 – 3 年。
2 – 10℃,试剂盒的保存期为2 – 3 年。
在工业生产的疫苗和治疗用生物制品(干扰素、白细胞介素、单克隆抗体、重组蛋白)中,宿主细胞残余DNA污染直接影响终产品和整个生产过程的质量和产量,可能引起动物致瘤、感染病毒DNA等严重后果,中国药典、WHO、EU、FDA对宿主细胞DNA残留*都有规定。传统的DNA提取方法蛋白酶K-SDS法在SDS的稳定和促进下降解细胞中的蛋白质特别是核酶,再经有机溶剂萃取得到高质量的DNA,但毒DNA和生物制品宿主细胞残余DNA的提取试剂盒。使用新型提取步骤,用(NaI)作为促溶剂,稳定且灵敏度高、时间短,无有毒溶剂,无需复杂和费力操作,即可从样品中得到高质量和高回收率的DNA。