haemtech HCAPC-0080说明书

Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注册公司,是一家专业从事体外研究用高质量血浆蛋白分离和表征的主要制造商。HTI的重点是凝血级联中涉及的蛋白质,以及骨代谢的调节。HTI产品系列包括超过150种高度纯化和充分表征的蛋白质,包括酶原,酶,辅因子和抑制剂,以及单克隆和多克隆抗体的互补系列。还可提供因子缺乏的等离子体和定制的血液采集管,用于临床研究。提供的服务包括定制蛋白质纯化,蛋白质修饰,化验开发,合同制造和合同研究。

 

haemtech Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注册公司,是一家专业从事体外研究用高质量血浆蛋白分离和表征的主要制造商。HTI的重点是凝血级联中涉及的蛋白质,以及骨代谢的调节。HTI产品系列包括超过150种高度纯化和充分表征的蛋白质,包括酶原,酶,辅因子和抑制剂,以及单克隆和多克隆抗体的互补系列。还可提供因子缺乏的等离子体和定制的血液采集管,用于临床研究。提供的服务包括定制蛋白质纯化,蛋白质修饰,化验开发,合同制造和合同研究。

 

haemtech HCAPC-0080说明书

Activated Protein C

活化蛋白C.

 

活化蛋白C(APC)对因子Va的失活
表示APC对因子Va的蛋白水解失活,其中:PS =蛋白质S,PCPS =磷脂囊泡(或细胞表面)和Ca ++ =钙离子。因子Va对形成因子Vai的失活是由APC(实心箭头)在三个特定位点处的因子Va重链(94K)的蛋白水解产生的(1,2)。因子Va重链中这些切割位点的位置如下:(人:R306,R506和R679)和(牛:R306,R505和R662)。辅因子分子的*失活需要在精氨酸-306位置切割。通过活化蛋白C在精氨酸-306处的切割仅在膜的存在下发生,并且需要在精氨酸-505处预先切割重链。APC对因子Va轻链的蛋白水解仅发生在牛分子中,并且不需要灭活(虚线箭头)。

活化蛋白C(APC)是一种抗凝血丝氨酸蛋白酶,来自两条链,维生素K依赖性酶原,蛋白C(3-7)。α-凝血酶和血栓调节蛋白之间的复合物在蛋白C的重链中催化Arg-12(牛中的Arg-14)的单一切割,以产生活化的蛋白C.几种非生理学相关的蛋白酶,例如RVV-X活化剂,胰蛋白酶和PROTAC也能够激活蛋白C.

APC起到抗凝血剂的作用,其催化辅因子Va和VIIIa的蛋白水解失活,导致凝血酶原酶和因子Xase复合物的抑制。因子Va和VIIIa的失活是Ca 2+和磷脂依赖性的。维生素K依赖性辅因子蛋白S通过与APC形成1:1复合物(Kd = 6×10-9M)适度地增加该失活速率(8)。

有几个因素会削弱APC的抗凝血活性。因子Xa通过竞争因子Va上的类似结合位点来保护因子Va免受APC的蛋白水解。凝血酶也被提议作为APC的调节剂通过蛋白质S的蛋白水解失活。此外,APC受循环肝素依赖性蛋白质的调节。 C抑制剂(PAI-3),循环肝素非依赖性蛋白C抑制剂,血小板衍生蛋白C抑制剂和PAI-1。据报道,在APC和两种类型的PAI之间形成的复合物是在输注APC或体内产生APC时观察到的纤维蛋白溶解增加的原因。

除了我们的标准APC制剂,还可以获得含有丹磺酰-EGEG-氯代甲基酮的活性位点封闭形式。

 

 

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HCAPC-0080 人类活性蛋白C

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尺寸

50微克

公式

50%(体积/体积)甘油/ H 2 O.

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存储

-20℃下

纯度

通过SDS-PAGE> 95%

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活动决定

显色分析

保质期(妥善保存)

12个月

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 HCAPC-DEGR 人类活化蛋白C – DEGR(活性位点受阻)

尺寸

50微克

公式

20mM Tris,150mM NaCl,pH 7.4

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存储

-80℃下

纯度

通过SDS-PAGE> 95%

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活动决定

显色分析

保质期(妥善保存)

12个月

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 BCAPC-1080 牛活性蛋白C

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尺寸

50微克

公式

50%(体积/体积)甘油/ H 2 O.

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存储

-20℃下

纯度

通过SDS-PAGE> 95%

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活动决定

显色分析

保质期(妥善保存)

12个月

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 BCAPC-DEGR 牛活性蛋白C – DEGR(活性位点受阻)

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尺寸

50微克

公式

20mM Hepes,150mM NaCl,pH 7.4

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存储

-80℃下

纯度

通过SDS-PAGE> 95%

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活动决定

显色分析

保质期(妥善保存)

12个月

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通过用凝血酶活化然后通过离子交换层析(4)从纯化的蛋白C制备活化的蛋白C. APC以50%(vol / vol)甘油/ H2O供应,应储存在-20oC。通过SDS-PAGE分析确定纯度,并使用显色底物测定法测量活性。根据APC耐药性测定的要求,还测试了所有生产批次的APC延长正常人血浆aPTT的能力(10,11)。每批次提供该测试的结果,作为aPTT(+/- APC)比率(10nM APC)。

凝胶

Novex 4-12%Bis-Tris

加载

人aPC,每泳道1μg

缓冲

MOPS

标准

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(191 kDa),磷酸化酶B(97 kDa),BSA(64 kDa),谷氨酸脱氢酶(51 kDa),酒精脱氢酶(39 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌红蛋白红(19 kDa),溶菌酶(14 kDa的)

 

本土化

等离子体

行动方式

抗凝血剂,使因子Va和VIIIa失活

分子量

56,200(人类)(5)
52,650(牛)(5)

消光系数

Ë

1%

1厘米,280纳米

 

= 14.5(人类)(9)

 

 

= 13.7(牛)(9)

 

等电点

4.4-4.8(人类)(9)
4.2-4.5(牛)(9)

结构体

两条链,Mr = 35,000和21,000,二硫键连接,NH2-末端gla结构域两个EGF结构域

碳水化合物百分比

23%(人类)(5)
14%(牛)(5)

翻译后修改

十一个gla残留物(牛),九个gla残基(人),一个β-羟基天冬氨酸

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