Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒 蓝色荧光

简要概述

        Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。荧光胺本质上是非荧光性的，但是一旦与脂肪胺类（包括：多肽、蛋白质）反应便会产生一种带蓝绿色荧光的衍生物。Amplite荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒提供了一种在水溶液中对蛋白质进行定量检测的简单方法。它的荧光信号可以容易读出Ex/Em = 380 /470 nm。该Amplite 荧光胺蛋白质检测法可以便捷地用于96或384微孔板分析中，并且无需任何分步操作就可以容易地实现自动化。本检测法可以在30分钟内完成。用Amplite 荧光胺蛋白质检测试剂盒，可以检出少至3 ug/mL的BSA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备荧光胺工作溶液（25μL）
2.添加BSA标准品或测试样品（75μL）
3.在室温下孵育5-30分钟
4.在Ex / Em = 380 / 470nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.1标准溶液

BSA标准
通过进行1：2连续稀释，将适量的BSA标准品1 mg / mL（组分C）稀释到PBS中，以获得BSA标准品（BS7-BS1）的连续稀释液。

2.工作溶液

将DMSO（组分B）的全部内容物加入荧光胺（组分A）的瓶中，并充分混合。 注意：2.5 mL的荧光胺工作溶液足以用于1个平板。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准品（BS1-BS7,1.563至100μg/ mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备BSA标准品（BS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用30μL试剂代替75μL。

2.向BSA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μL荧光胺工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入10μL荧光胺工作溶液，总体积为40μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 380 / 470nm的荧光板读数器监测荧光增加。

Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光

简要概述

        Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，鞘磷脂酶（SMase）是一种酶，负责将鞘磷脂（SM）切割成神经酰胺。细胞中SMase的激活在细胞反应中起重要作用。已经基于它们的阳离子依赖性和作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶（SMase）。它们是溶酶体酸性SMase，分泌锌依赖性酸性SMase，镁依赖性中性SMase，镁依赖性中性SMase和碱性SMase。在这五种类型中，溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞对应激反应中产生神经酰胺的主要候选物。

        我们的Amplite 比色鞘磷脂酶检测试剂盒为检测中性SMase活性或筛选其抑制剂提供了一种灵敏的方法。。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液（50μL）

添加SMase标准品和/或SMase测试样品（50μL）

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物（50μL）

在室温下孵育

持续1-2小时监测655nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶（或瓶）。

操作方法

1.准备鞘磷脂工作液：

将50μL鞘磷脂（组分B）加入5mL SMase反应缓冲液（组分D）中，并充分混合。

注意：应及时使用鞘磷脂工作液。

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品：

2.1将20μL含0.1％BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品（组分F）的小瓶中，制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意：应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液（来自步骤2.1）加入1000μL测定缓冲液（组分E）中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意：稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定，应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入白壁/透明底或透明96孔微孔板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液（来自步骤1）加入到鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（来自步骤2.4）。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

3.准备200X Amplite Blue原液：

将100μLDMSO（组分G）加入到Amplite Blue（组分C）的小瓶中以制备200X Amplite Blue原液。

注意1：未使用的Amplite Blue原液应等分并保存在-20℃（避光）。

注意2：在硫醇（如DTT）存在下，Amplite Blue不稳定。反应中DTT的浓度应低于10μM。Amplite Blue在高pH（> 8.5）下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

4.准备鞘磷脂酶测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分E）加入酶混合物瓶（组分A）中，并充分混合。

4.2将50μL200XAmplite Blue原液（来自步骤3）加入到酶混合溶液瓶中（来自步骤4.1，在开始测定之前制备鞘磷脂酶测定混合物）。

注意1：应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

注意2：混合物的混浊是正常的; 它不会干扰分析性能。

5.运行鞘磷脂酶测定：

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物（来自步骤4.2）加入鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品（来自步骤2.4）的每个孔中，以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时（避光）。

5.3使用吸光度酶标仪在655 nm处检测吸光度的增加。

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

简要概述

        Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，。SMase的激活在细胞反应中起重要作用，例如细胞生长调节，细胞分化，细胞周期停滞和程序性细胞死亡。已经基于它们的阳离子依赖性和作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶（SMase）。 它们是溶酶体酸性SMase，分泌锌依赖性酸性SMase，镁依赖性中性SMase，镁非依赖性中性SMase和碱性SMase。在五种类型的鞘磷脂酶中，溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞应激反应中产生神经酰胺的主要因素。

        我们的Amplite 荧光酸性鞘磷脂酶检测试剂盒是检测酸性SMase活性或筛选其抑制剂的灵敏方法之一。。 它可用于测量血液，细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”测定，与HTS液体处理仪器兼容。

点击查看光谱

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液（50μL）

添加SMase标准品和/或SMase测试样品（50μL）

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物（50μL）

在室温下孵育持续1-2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（在570 nm处截止）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶（或瓶）。

操作方法

1.准备鞘磷脂工作液：

将50μL鞘磷脂（组分B）加入5mL SMase反应缓冲液（组分D）中，并充分混合。

注意：应及时使用鞘磷脂工作液。

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品：

2.1将20μL含0.1％BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品（组分F）的小瓶中，制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意：应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液（来自步骤2.1）加入1000μL测定缓冲液（组分E）中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意：稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定，应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入固体黑色96孔微量培养板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液（来自步骤1）加入到鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（来自步骤2.4）。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

3.准备200X Amplite Red原液：

将80μLDMSO（组分G）加入到Amplite Red（组分C）的小瓶中以制备200X Amplite Red储备溶液。

注意1：未使用的Amplite Red原液应等分并保存在-20℃（避光）。

注意2：在硫醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT的浓度应低于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

4.准备鞘磷脂酶测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分E）加入酶混合物瓶（组分A）中，并充分混合。

4.2在开始测定之前，将25μL的200X Amplite Red储备溶液（来自步骤3）加入到酶混合物溶液瓶（来自步骤4.1）中以制备鞘磷脂酶测定混合物。

注意：应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

5.运行鞘磷脂酶测定：

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物（来自步骤4.2）加入鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品（来自步骤2.4）的每个孔中，以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时（避光）。

5.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm（在570nm处截止）观察荧光增加。